Векторы интегрирующие

Векторы интегрирующие * вектары, якія інтэгруюцца * integration vectors — векторы, стабильно встраивающиеся в геном клетки хозяина. Это возможно благодаря наличию последовательностей нуклеотидов, гомологичных последовательностям геномной ДНК. В результате функционирования общей системы рекомбинации происходит объединение хромосомной и плазмидной ДНК интегрирующего вектора, которое приводит к стабильному включению всей векторной плазмиды в хромосому. Примером такого интегрирующего вектора служит плазмида pFH7 B. subtilis. Векторная плазмида содержит фрагмент ДНК умеренного бактериофага SPβ и после попадания в клетки B. subtilis, лизогенные по данному бактериофагу, эффективно интегрируется в профаг. Плазмида содержит ген устойчивости к хлорамфениколу cat, и клетки приобретают этот признак. Индукция профага приводит к образованию фаговых частиц, трансдуцирующих эту плазмиду и ассоциированный с ней признак устойчивости к хлорамфениколу. Интеграция плазмиды SPβ в бактериальную хромосому происходит по механизму гомологичной рекомбинации с участием гена recE. Способность к интеграции в бактериальную хромосому обнаруживают и другие плазмиды, содержащие фрагменты хромосомной ДНК клеток-хозяев, что продемонстрировано, в частности, для плазмид E. coli и Streptococcus pneumoniae. Интегрирующие векторные системы, в которых используется тот же принцип гомологичной рекомбинации, разработаны и для эукариотических клеток, включая клетки животных и растений. В результате такие работы привели к развитию целого направления исследований по созданию трансгенных животных и растений, стабильно наследующих и экспрессирующих гены, искусственно введенные в их геном. Наличие феномена гомологичной рекомбинации между хромосомной ДНК клетки-хозяина и векторной ДНК, содержащие гомологичные хромосомной ДНК клетки-хозяина последовательности нуклеотидов, приходится учитывать при получении соответствующих генно-инженерных конструкций. Такая неконтролируемая рекомбинация в большинстве случаев нежелательна, т. к. может приводить к потере или к структурным перестройкам клонированных фрагментов ДНК. Чтобы свести последствия этого явления к минимуму, используют специальные штаммы клеток-хозяев, в которых общая система рекомбинации не функционирует, напр., вследствие мутационной инактивации гена recA E. coli или recE B. subtilis.